實驗中為了確定信號和背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按
Elisa試劑盒說明書常規提供的范圍進行操作。對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。
在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批Elisa試劑盒說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。為了優化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
Elisa試劑盒的蛻變其實是比較常見的一個問題，哪些因素會導致蛻變呢？
1.辦法學的影響，ELISA測定形式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其間競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時差所引起的競爭等要素的影響，成果重復性較差，質量較難操控。
2.試劑要素，不同批次的ELISA試劑在制作進程中很難保證質量*一致，即使是通過批批檢的項目其檢測成果也存在差異，因而必須挑選和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執行這一規范可以防止因試劑批號改動而從頭建立質控體系及從頭評估試劑的雜亂進程，并且能夠保證成果的穩定性；關于效期短、使用率低的試劑，應當小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，防止重復凍融造成試劑的失效。
3.樣本要素，標本攪擾要素包含內源性攪擾要素和外源性攪擾要素，前者包含類風濕因子、補體、異嗜性抗體、本身抗體、溶菌酶等，后者包含標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時刻過長、標本凝結不全、冷凍標本的重復凍融等。
4.操作要素，Elisa試劑盒操作步驟雜亂，操作不當將引起較大的差錯。加樣、溫育、洗刷、顯色、比色。
5.灰區的設置，通常情況下，ELISA定性試驗以“陽性”和“陰性”來報告成果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判別值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定成果報告的根據。
6.標本復查，手工檢測進程雜亂，影響要素較多，即使室內質控在控，也或許因孔間差異而造成成果的差異，因而加大復查力度是保證成果準確性的牢靠辦法，比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及罕見形式的檢測成果進行復查。
